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  • 20122-9
    免疫親和純化的操作步驟

    1.主要內容純化率為1000~10000倍??焖偌兓乖?,層析柱??芍貜褪褂???色@得純化的抗原。不能用于定量測定。純化效果取決于抗原的濃度和抗體的親和力需要適當純化的抗體。2.操作步驟(1)將抗體結合到蛋白A或蛋白G微珠上。對于一般用途的層析柱,每毫升濕的微珠大約可以結合2mg單克隆抗體或親和純化的多克隆抗體。將抗體和蛋白A或蛋白G微珠混合制成稀薄的勻漿,在總量為10ml的溶液中加入大約lml微珠,室溫孵育1h,輕輕搖動混勻。(2)用10倍體積的0.2mol/L硼酸鈉(pH9...

  • 20122-9
    為何使用標記蛋白

    標記蛋白具有許多優(yōu)點。原則上,該方法為檢測各種細胞成分中感興趣的蛋白提供廠新的手段。①如果開放閱讀框已經被克隆化,但是由于蛋白是新發(fā)現的,或者由于蛋白免疫原性較弱,目前尚沒有針對該蛋白產物的抗體時,此標記技術具有重要的應用價值。隨著基因組的研究,由基因工程進入蛋白工程,標記技術顯得越來越重要。②由于標記物不是天然蛋白氨基酸序列的固有部分,與標記物結合的試劑在進行蛋白提純過程中,對蛋白功能產生影響的可能性較小。③只要具備適當的載體,標記蛋白可在任何細胞中進行表達;例如,相同的標...

  • 20122-9
    Real-Time PCR

    所謂Real-TimePCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環(huán)擴增產物量的變化,通過Ct值和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析。real-timePCR技術即實時熒光定量PCR避免了傳統PCR以終產物監(jiān)測定量產生的偏差,提高實驗的重復性。該技術已經被廣泛用于監(jiān)測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因...

  • 20122-9
    探秘云南轉基因克隆豬 神奇熒光助推人類醫(yī)學研究

    摘要:云南農業(yè)大學動物科學技術學院近日成功育成10頭攜帶綠色熒光蛋白和瘦素蛋白的轉基因克隆豬引起各界廣泛關注,2月3日記者在云南農業(yè)大學了解到,這一成果將有助于脂肪沉積以及人類肥胖病和糖尿病等疾病的研究,也將使轉基因克隆技術在功能基因驗證、疾病模型、異種器官移植等領域的應用前景更為廣闊。云南農業(yè)大學動物科學技術學院近日成功育成10頭攜帶綠色熒光蛋白和瘦素蛋白的轉基因克隆豬引起各界廣泛關注,2月3日記者在云南農業(yè)大學了解到,這一成果將有助于脂肪沉積以及人類肥胖病和糖尿病等疾病的...

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